UA-Glo® Nano-luc Live Cell Assay System

反应缓冲液及底物分别混灌装于10 ml 或100 ml的棕色瓶及2ml的螺旋管中，规格如下：

1. 在96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的实验细胞，细胞可以是分别表达带有微荧光素酶大小片段标签的两个目标蛋白的瞬转细胞，稳定细胞株或内源性表达细胞系。建议使用白色透明底板。

2. 根据实验需求对细胞进行相关处理，并继续培养合适的时间。

3. 取出检测缓冲液，平衡至室温（22℃-25℃）。荧光素酶反应对温度变化敏感。试剂和实验板需要平衡到室温，测试过程温度保持恒定（±1℃）

4. 离心微荧光素酶底物管将内容物收集于管底，置于冰上。

5. 取出实验细胞培养板，平衡至室温。

6. 根据实验需求确定检测试剂用量，建议96孔板每孔加入50 µL检测试剂, 384孔板每孔加入10 µL检测试剂。

7. 配制检测试剂：微荧光素酶底物为200x，使用前用缓冲液稀释成1x的检测试剂，充分混匀。注意避光。

8. 根据实验需要可以选择以下检测方法：

a) 弃去实验细胞板培养液后96孔板每孔直接加入50µL检测试剂(384孔板加入10µL)，此方法提供最高的信号强度和最低的检测背景。

b) 弃去实验细胞板培养液后96孔板每孔加入100µL 的无血清培养基，例如DMEM (384孔板加入20µL), 加入50µL检测试剂(384孔板加入10µL)，此方法有利于保持更好的细胞状态 。

c) 不弃去实验细胞板培养液，96孔板直接加入50µL检测试剂(384孔板加入10µL)：此方法适合HTS实验。培养基内的FBS会影响信号强度和提高检测背景，可以用低浓度血清例如2% FBS接种实验细胞以减小FBS的影响。具体适合的FBS浓度可能需优化。

9. a检测方法直接暗处放置10min， b和c检测方法轻轻振板混匀，暗处放置10min

10. 多功能读板仪上读取发光信号。

1. 本产品仅作科研用途。

2. 不同批次的试剂不建议混合使用。

3. 非经严格验证，不建议随意改变检测试剂用量。

4. 按照说明书分装储存检测试剂，保证试剂的稳定性。