极化难题？不存在的！优爱生物Th1极化超全攻略来袭

在细胞免疫的世界里，辅助性T细胞1（Th1）主导的免疫应答是抵御细胞内病原体（如病毒、某些细菌）和抗肿瘤的核心力量。无论是研究感染免疫、自身免疫病，还是开发新型癌症免疫疗法，成功地在体外诱导Th1细胞分化都是关键的第一步。

 

然而，面对纷繁复杂的细胞因子、抗体和培养条件，你是否也曾感到困惑？别担心，这篇“Th1极化超全攻略”将为你扫清一切障碍，带你从入门到精通，彻底掌握人与小鼠Th1极化的艺术！

 

第一部分：理论基石——Th1细胞的前世今生

 

1. Th1细胞是什么？
   

Th1细胞是CD4+ T细胞的一个功能亚群，其主要特征是分泌IFN-γ、TNF-α和IL-2。它们是细胞免疫的“指挥官”，通过分泌IFN-γ来强力激活巨噬细胞、NK细胞和细胞毒性T细胞（CTL），从而建立起强大的抗细胞内病原体和抗肿瘤免疫防线。

 

2. 为什么要进行体外Th1极化？
   

机制研究： 探究特定基因、分子或药物在Th1分化通路中的作用。

疾病模型： 获取大量的Th1细胞，用于过继性转移治疗或构建炎症模型。

免疫疗法开发： 为CAR-T或其他过继细胞疗法准备具有特定功能的T细胞。

 

第二部分：核心武器库——极化因子详解

Th1分化的核心信号通路已被广泛研究，其极化条件也相对成熟和经典。

“黄金标准”信号通路：

• TCR信号（第一信号）： 通过抗CD3/CD28抗体模拟抗原提呈，提供激活的起始信号。
  
  
• IL-12/STAT4通路（核心驱动）： IL-12是诱导Th1分化的最关键细胞因子，它通过激活转录因子STAT4，启动Th1相关基因的表达。

 

第三部分：实战操作篇——小鼠与人Th1极化方案

 

A.小鼠Th1极化方案

 

1、细胞培养

用10 µg/ml anti-mouse CD3ε Recombinant mAb和2 µg/ml anti-mouse CD28 mAb包被48孔细胞培养板过夜，第二天洗板封闭后加入分选后的CD4+ T细胞，培养基用RPMI-1640 加10μg/mL anti-IL-4,  5 ng/mL IL-2,  30 ng/mL IL-12, 55 μM β-巯基乙醇及10 % FBS培养；

 

48 小时开始每 12 小时观测细胞浓度，如果细胞密度很大，则将细胞分到新的孔中，并加以上培养液刺激（不用添加anti-mouse CD3ε mAb 和 anti-mouse CD28 mAb刺激）；

 

培养5天后收集细胞，将胞密度控制为1*10⁶/ml，用10ng/ml PMA，1μg/ml Ionomycin，10μg/ml Brefeldin A共处理5h。

 

阴性对照组Th0细胞：用10 µg/ml anti-mouse CD3ε mAb和2 µg/ml anti-mouse CD28 mAb包被48孔细胞培养板过夜，第二天洗板封闭后加入分选后的CD4+ T细胞，维持培养基为RPMI-1640 加 10 % FBS, 55 μM β巯基乙醇，10μg/mL anti-mouse IFNγ，10μg/mL anti-mouse IL-4 培养；

 

48 小时开始每 12 小时观测细胞浓度，如果细胞密度很大，则将细胞分到新的孔中，并加以上培养液（不用添加 anti-mouse CD3ε和anti-mouse CD28 mAb）培养5天。

 

2、流式检测

 

收集细胞后用流式检测抗体染色上机

 

Mouse IFN-GMA FITC (clone: XMG1.2)

 

Th1 Polarization Kit, mouse/小鼠Th1极化套装_UA090017_优爱(UA BIOSCIENCE)官网

 

 

B. 人Th1极化方案

 

1、细胞培养

 

用5 µg/ml anti-human CD3 mAb包被96孔细胞培养板过夜，第二天洗板封闭后加入 CD4 Nanobeads, human（S0B5740）分选后的CD4+ T细胞 ，培养基用RPMI-1640 加200U /mL IL-2, 20 ng/ml IL-12, 10 µg/mL Anti-huamn IL-4 , 55 μM β-巯基乙醇，1 µg/ml anti-human CD28 mAb及10 % FBS培养；

 

48 小时开始每 12 小时观测细胞浓度，如果细胞密度很大，则将细胞分到新的孔中，并加以上培养液刺激（不用添加CD3,CD28抗体刺激）；

 

培养5天后收集细胞细胞，将胞密度控制为10⁶/ml，用10ng/ml PMA+1μg/ml Ionomycin，10μg/ml Brefeldin A共处理5h。

 

阴性对照组Th0细胞: 用5 µg/ml anti-human CD3 mAb包被96孔细胞培养板过夜，第二天洗板封闭后加入分选后的CD4+ T细胞, 培养基用RPMI-1640 加 10 % FBS, 55 μM β巯基乙醇, 10μg/mL Anti-human IL-4, 10μg/mL Anti-Human IFN-γ, 200U/ml IL-2 , 1 µg/ml anti-human CD28 mAb培养，48 小时开始每 12 小时观测细胞浓度，如果细胞密度很大，则将细胞分到新的孔中，并加以上培养液刺激（不用添加CD3,CD28抗体刺激）培养5天。

 

2、流式检测

 

收集细胞后用流式检测抗体染色上机，FITC Mouse Anti-Human IFN-γ Antibody（S0B5651 ）

 

Th1 Polarization Kit, Human /人Th1极化套装_UA090016_优爱(UA BIOSCIENCE)官网

 

免责声明： 本文提供的方案为通用参考指南，具体实验条件请根据自身实验体系行优化。