PE-Labeled CD19 His Tag：B细胞世界的"通用荧光身份证"

PE-Labeled CD19 His Tag是一种核心的B淋巴细胞特异性检测探针，专为精准识别、定量和分析所有成熟B细胞及其前体而设计。其核心功能在于将B细胞谱系最广泛、最稳定的表面标志物CD19，与高亮度的藻红蛋白荧光报告系统相结合，从而为研究者提供一种高强度、高特异性的工具，用以在复杂的细胞混合物中"点亮"整个B细胞家族。它在基础免疫学研究、临床血液肿瘤诊断、免疫监控及细胞治疗领域，是不可或缺的"分子身份证"读取器。

该蛋白是一种重组单链蛋白或多结构域融合蛋白，其设计旨在实现最优的靶向结合与信号输出。它通常包含三个关键的功能组件：

探针的核心部分通常是抗人CD19单克隆抗体的单链可变区片段，或经过工程改造的CD19配体结构域。CD19是分子量为95 kDa的跨膜糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族。它从B细胞发育的最早期（前B细胞阶段）开始表达，并持续存在于所有成熟B细胞直至分化为浆母细胞阶段，是全B细胞最可靠的谱系标志物。它参与形成B细胞受体复合物，调节B细胞活化阈值。

位于蛋白末端的多聚组氨酸序列。其主要功能是：

简化纯化流程：利用镍柱亲和层析，实现高效、高特异性的纯化，确保探针的高活性和批次间一致性。

辅助固定与偶联：可用于将探针定向固定于生物传感器芯片、微珠或固相表面，用于功能研究或构建检测阵列。

通过稳定的化学偶联，将R-藻红蛋白连接到蛋白质上。PE是由多个发色团组成的多聚体蛋白，在488-561 nm激光激发下发出强烈橙色/红色荧光（~575 nm）。

超高亮度：PE是流式细胞术中信号最强的荧光染料之一，其荧光强度远超FITC等小分子染料，能产生极高的信噪比。

广泛应用兼容性：其发射光谱使其成为多色流式分析中与FITC、PerCP、APC等染料配对的理想选择，广泛兼容几乎所有流式细胞仪和荧光显微镜。

该探针如同一个专为B细胞设计的"高亮身份证扫描仪"。抗CD19 scFv是精确识别B细胞唯一"身份证号码"（CD19）的"扫描头"；PE是将识别信息转化为极其醒目、无法忽视的橙色光信号的"高亮显示屏"；而His标签则是生产和优化过程中的"精密调节手柄"。

该探针的核心应用机制是基于CD19抗原的谱系特异性，实现对整个B细胞群体的高强度荧光标记。

覆盖绝大多数B细胞：从骨髓中的前B细胞、未成熟B细胞，到外周血和淋巴组织中的初始B细胞、记忆B细胞、滤泡和边缘区B细胞，直至浆母细胞，均表达CD19。因此，该探针能标记几乎全部的B细胞谱系，是进行B细胞计数和比例分析的黄金标准。

高亲和力确保强结合：其抗CD19结合模块具有高亲和力，即使在复杂样本（如全血、骨髓、组织分选细胞）中，也能与细胞表面的CD19分子形成稳定复合物，确保标记的牢固性。

卓越的信噪比：PE的极高亮度使得即便是低密度表达CD19的B细胞前体，也能与阴性细胞群清晰区分。这降低了设门的主观性，提高了检测的准确性和可重复性。

适用于弱表达样本和稀有亚群分析：对于某些病理状态（如免疫抑制治疗后）或特定发育阶段的B细胞，CD19表达可能下调。PE的高亮度能确保这些细胞仍被可靠检出，也利于对稀有B细胞亚群（如调节性B细胞）进行鉴定和分选。

在多色Panel中作为支柱通道：因其信号强且稳定，常被用作多色流式实验中的"支柱"荧光通道，用于首先圈定总B细胞门，在此基础上再分析其他标志物的表达。

功能化表面与分析：固定化的探针可用于研究可溶性CD19蛋白或细胞裂解液中CD19的相互作用。

质量控制：通过His标签的检测，可对探针的浓度和完整性进行辅助分析。

该探针的应用范围极广，是B细胞相关研究和临床实践的基石。

B细胞发育与分化追踪：在骨髓和胸腺外发育环境中，结合CD10、CD20、CD34、IgM、IgD等标志物，精确划分B细胞发育的各个阶段。

免疫分型的核心组分：在临床和科研免疫分型中，CD19与CD3、CD16/CD56的组合是定义淋巴细胞三大类（T细胞、B细胞、NK细胞）的基础。该探针是实现这一关键分类的首选试剂。

B细胞功能与活化状态研究：与活化标记（如CD25、CD69、CD86）和分化标记（如CD27、CD38）联用，分析B细胞在免疫应答中的活化状态和分化方向。

B细胞淋巴瘤/白血病的通用标志物：几乎所有起源于B细胞的恶性肿瘤都表达CD19，包括慢性淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、弥漫大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤等。因此，该探针是诊断B细胞肿瘤并将其与T细胞或髓系肿瘤区分开的决定性工具。

微小残留病（MRD）检测的关键：在B-ALL、CLL等疾病治疗后，使用高灵敏度多色流式细胞术（以PE-CD19作为核心标记之一）检测骨髓或外周血中极少量的残留肿瘤细胞，是评估治疗深度、预测复发风险的金标准方法。

鉴别诊断：帮助鉴别CD19阴性的浆细胞肿瘤（如多发性骨髓瘤）与CD19阳性的其他B细胞肿瘤。

原发性免疫缺陷病：如X连锁无丙种球蛋白血症（XLA，因BTK基因突变导致B细胞发育阻滞），患者外周血B细胞（CD19+细胞）数量显著减少或缺失。该探针是重要的筛查和诊断工具。

继发性免疫缺陷与免疫监控：监测化疗、免疫抑制剂（如利妥昔单抗）或造血干细胞移植后患者B细胞重建的动力学。

自身免疫病研究：分析系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等患者外周血或组织中B细胞各亚群的数量、比例和功能状态变化。

靶点验证：用于确认患者肿瘤细胞表面的CD19表达水平，是决定是否适用CD19-CAR-T治疗的前提。

疗效监测：治疗后，监测外周血中CD19阳性B细胞（包括正常和恶性B细胞）的清除情况，是评估CAR-T细胞体内功能活性的直接指标。

检测CD19阴性逃逸：肿瘤复发时，可用该探针检测是否出现了CD19表达下调或丢失的克隆。

B细胞分选：通过与抗PE磁珠联用，或直接进行流式分选，获得高纯度的CD19阳性细胞，用于过继性治疗或体外研究。

作为经典工具，其未来发展将聚焦于提升信息维度、量化精度以及与临床决策的整合度。

定量流式细胞术：使用已知PE分子数的定量微球进行校准，将PE荧光强度转化为细胞表面CD19抗原的绝对分子数。这对于CAR-T治疗前的靶点密度评估、预测ADC药物疗效至关重要。

光谱流式与质谱流式：开发适用于光谱流式细胞仪或偶联稀有金属标签的CD19检测剂，在超高参数（>30色）分析中，更精确地解析B细胞极其复杂的异质性。

CITE-seq应用：将DNA条形码偶联的CD19抗体（基于相同结合簇）与转录组测序结合，在单细胞水平同时获取特定B细胞亚群的表面蛋白表达谱和全转录组信息。

PE-Labeled CD19 His Tag是免疫学和血液病学领域一个堪称典范的工具分子。它将B细胞最根本的谱系身份标识------CD19，与最醒目的光学信号报告系统------PE，通过现代蛋白工程技术完美结合，创造出一个强大、可靠、通用的"B细胞荧光身份证"。从绘制健康的B细胞发育图谱，到精确诊断复杂的B细胞恶性肿瘤；从监控免疫系统的平衡与失衡，到赋能革命性的CD19-CAR-T细胞疗法，这个探针始终是研究人员和临床医生手中不可或缺的"罗盘"。未来，随着单细胞技术、空间组学和精准医疗的飞速发展，以它为基准的B细胞检测技术将持续向更高维度、更精确定量和更紧密的临床整合方向演进，继续在探索免疫奥秘和战胜疾病的征程中发挥不可替代的核心作用。