Biotinylated BAFFR/TNFRSF13C Fc&Avi Tag蛋白：B细胞免疫研究与治疗开发的标准化检测工具

一、 概述：BAFF/BAFFR通路的重要性与多重标签蛋白的设计优势

BAFFR（B细胞激活因子受体，亦称TNFRSF13C）是肿瘤坏死因子受体超家族（TNFRSF）成员，为BAFF（B细胞激活因子）的高亲和力特异性受体。BAFF/BAFFR信号对B细胞的存活、成熟和稳态维持至关重要，该通路的失调与系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等多种自身免疫性疾病及部分B细胞恶性肿瘤密切相关。

 

开发靶向此通路的疗法（如BAFF/APRIL双特异性抑制剂、BAFFR抗体）需要高效、稳定的研究工具。Biotinylated BAFFR/TNFRSF13C Fc&Avi Tag蛋白是一种经过多重工程化设计的重组蛋白，整合了三种功能模块：Fc标签、AviTag和位点特异性生物素化。此设计旨在提供一种高灵敏度、高特异性、即用型的标准化试剂，专为基于亲和力的检测与互作研究平台（如流式细胞术、ELISA、SPR/BLI）而优化。

 

二、 分子构建、表达与表征

该蛋白通过理性设计，旨在模拟天然受体的配体结合功能，并实现最佳的检测性能。

 

核心结构：

包含人BAFFR的完整胞外结构域（ECD），负责特异性结合BAFF及其同源三聚体配体。

 

标签系统与功能：

Fc标签（通常为人IgG1 Fc）：

位于蛋白C端或N端。其主要功能是：

 

形成稳定的二聚体：模拟细胞表面受体天然的二价或多价状态，可显著提高其与三聚体配体BAFF的亲和力（亲合力效应）。

 

通用检测接口：可通过抗人Fc抗体或Protein A/G进行高效捕获或检测，兼容多种免疫学平台。

 

延长半衰期：在体内应用中，可改善药代动力学特性。

 

AviTag：

一个15个氨基酸的短肽标签，与生物素连接酶（BirA）具有高亲和力。

 

位点特异性生物素化：在体外使用BirA酶对AviTag进行生物素标记。这一过程是可控、高效的，确保每个蛋白分子在特定位点（AviTag）连接单个生物素分子。这与随机赖氨酸生物素化相比，优势显著：

 

均一性：产物均一，批次间差异小。

 

定向固定：生物素化位点确定，有利于将蛋白以统一方向、最大化暴露活性位点的方式固定到链霉亲和素（SA）基质上。

 

保持活性：避免了随机标记可能导致的活性位点掩蔽或蛋白失活。

 

表达与纯化：

通常在哺乳动物表达系统（如HEK293）中生产，以确保正确的折叠和糖基化。纯化过程通常采用Protein A亲和层析，利用Fc标签高特异性地捕获目标蛋白，获得高纯度的产品。

 

三、 核心应用领域

流式细胞术检测细胞表面BAFF（或APRIL）：

原理：利用该生物素化蛋白作为"探针"，通过其BAFFR部分结合细胞表面的BAFF。随后，使用荧光标记的链霉亲和素（SA-荧光染料）进行信号放大与检测。

 

优势：相比传统抗体，此探针可直接识别天然配体，用于定量分析B细胞、T细胞或肿瘤细胞等表面BAFF的表达水平，在研究疾病机制或药物对配体脱落的抑制效果时尤为有用。

 

开发高灵敏度ELISA/免疫检测方法：

捕获或检测试剂：可作为标准化的捕获试剂（包被在链霉亲和素预包被的板上）来检测溶液中的BAFF；反之，也可作为检测试剂（与生物素化的抗BAFF抗体联用），通过SA-HRP系统放大信号。

 

均质化检测：适用于开发基于生物素-链霉亲和素桥接的均相免疫检测。

 

蛋白质相互作用研究与药物筛选：

SPR/BLI分析：将蛋白通过生物素-SA系统固定于传感器芯片，用于精确测定其与BAFF、候选治疗性抗体或小分子抑制剂的结合动力学（Kon, Koff, KD）和亲和力。

 

高通量筛选：作为标准化的靶点蛋白，用于建立基于微孔板的竞争性结合试验，筛选能够阻断BAFF/BAFFR相互作用的化合物库。

 

功能研究与信号通路分析：

作为诱饵受体：可溶性BAFFR-Fc蛋白本身可作为BAFF的抑制剂，在细胞培养实验中用于中和BAFF活性，研究该通路在B细胞存活或抗体产生中的特异性作用。

 

四、 产品优势与实验要点

核心优势：

高灵敏度与低背景：生物素-链霉亲和素系统是目前已知最强的非共价相互作用之一，能实现显著的信号放大，并因其高特异性而有效降低背景噪音。

 

即用型便利：预先完成位点特异性生物素化，用户无需自行标记，节省时间并确保结果一致性。

 

多功能性：单个蛋白兼容流式、ELISA、SPR/BLI、免疫沉淀等多种技术平台，提高了实验设计的灵活性。

 

稳定的二聚体形式：Fc介导的二聚化增强了与三聚体配体的结合能力，更真实地模拟生理状态下的相互作用。

 

关键实验注意事项：

避免生物素干扰：实验所用培养基、血清或缓冲液严禁含有游离生物素（如标准胎牛血清中含量较高），否则会竞争性抑制生物素化蛋白与链霉亲和素基质的结合，导致信号淬灭甚至假阴性。应使用透析过的血清或专用无生物素缓冲液。

 

储存与稀释：建议分装后于-80°C保存，避免反复冻融。稀释时需使用含载体蛋白（如BSA）的缓冲液以减少非特异性吸附。

 

滴定优化：对于新建立的实验体系（如流式检测），需对生物素化蛋白和SA-荧光染料的用量进行滴定优化，以确定最佳信噪比。

 

五、 总结

Biotinylated BAFFR/TNFRSF13C Fc&Avi Tag蛋白 代表了重组蛋白工程在生物检测应用中的一种高效解决方案。它将靶向特异性（BAFFR ECD）、结构稳定性（Fc二聚体）和检测通用性（AviTag/生物素）三者有机结合，为研究BAFF/BAFFR这一关键免疫检查点通路提供了标准化、高性能的核心试剂。

 

其主要价值体现在：

 

提升检测质量：为流式、ELISA等高要求应用提供高灵敏度、高特异性的探针。

 

加速药物研发：作为标准化的靶点，用于高通量筛选和候选药物的精确表征。

 

简化实验流程：即用型设计减少了方法开发中的变量，确保了实验结果的可靠性和可重复性。

 

该蛋白是免疫学家、药物研发人员和临床研究人员深入探索B细胞生物学、自身免疫病机制及开发相关创新疗法的有力工具。