ActRIIB Enzyme Activity Inhibitor Screening Kit

以384微孔板20uL体系为例（蛋白和化合物和底物的总体积是5μl）

1）配制Assay buffer D：（将1μl浓度为50mM的DTT计入到0.999mlAssay buffer中配置制AssaybufferD）

2）加 ActRIIB到384 微孔板里面，配制2.5XActRIIB，2.5XTOP浓度(8ul ActRIB母液 +40ulAssaybuferD)，2倍梯度稀释(24ulActRllB+24ul Assay buffer D)，终浓度是10μg/mL，每孔加 2μl;终浓度是10μg/mL,,每孔加2μl;

3） 加化合物(化合物用DMSO溶解和稀释）;

4） 在常温下孵育15mins;5） 加底物：底物最终浓度是50nM;

6） 加ATP：ATP最终浓度是25μM;

7） 常温下反应40mins;

8） 加入5μlADP-Glo™ Reagent，从而终止ADP生成反应并混匀，常温孵育40 分钟;

9） 将10μLKinase Detection Reagent加入反应体系中并混匀，将ADP转化为ATP，并引入萤光素酶和萤光素检测ATP ，孵育30-60 分钟 ;

10）记录发光信号。