Th17 Polarization Kit, Human /人Th17极化套装

1、细胞培养
用5 µg/ml CD3 抗体包被96孔细胞培养板过夜，第二天洗板封闭后加入用CD4 Nanobeads, human（S0B5740）分选后的CD4+ T细胞，培养基用RPMI-1640 加10 μg/mL IFN-γ抗体，10 μg/mL IL-4 抗体，30 ng/mL human IL-6, 10 ng/mL TGF-β1,20 ng/mL IL-23 ,20 ng/mL IL-1β, 55 μM β-巯基乙醇，1 µg/ml CD28抗体及10 % FBS培养, 48 小时开始每 12 小时观测细胞浓度，如果细胞密度很大，则将细胞分到新的孔中，并加以上培养液刺激（不用添加CD3,CD28抗体刺激），培养5天后收集细胞细胞，将胞密度控制为10⁶/ml，用10ng/ml PMA+1μg/ml lonomucin，10μg/ml Brefeldin A共处理5h。

阴性对照组Th0细胞: 用5 µg/ml anti-human CD3 mAb包被96孔细胞培养板过夜，第二天洗板封闭后加入分选后的CD4+ T细胞, 培养基用RPMI-1640 加 10 % FBS, 55 μM β巯基乙醇, 10μg/mL Anti-human IL-4, 10μg/mL Anti-Human IFN-γ, 200U/ml IL-2 , 1 µg/ml anti-human CD28 mAb培养，48 小时开始每 12 小时观测细胞浓度，如果细胞密度很大，则将细胞分到新的孔中，并加以上培养液刺激（不用添加CD3,CD28抗体刺激）培养5天。

2、流式检测
收集细胞后用流式检测抗体染色上机
抗体货号 Thermo 25-7179-42 IL-17A Monoclonal Antibody (eBio64DEC17), PE-Cyanine7

Store in separate containers to reduce the number of freeze-thaw cycles.