Treg Polarization Kit, Mouse/小鼠Treg极化套装

1、细胞培养
用10 µg/ml anti-mouse CD3ε mAb和2 µg/ml anti-mouse CD28 mAb包被48孔细胞培养板过夜，第二天洗板封闭后加入CD4 Nanobeads（ S0K0003 ）分选后的CD4+ T细胞，培养基用RPMI-1640 加10 μg/mL anti-IFN-γ, 10 μg/mL anti-IL-4, 1ng/mL IL-2, 30 ng/mL TGF-β1, 55 μM β-巯基乙醇及10 % FBS培养, 48 小时开始每 12 小时观测细胞浓度，如果细胞密度很大，则将细胞分到新的孔中，并加以上培养液刺激（不用添加CD3,CD28抗体刺激），培养5天后收集细胞细胞，将胞密度控制为10⁶/ml，用10ng/ml PMA,1μg/ml Ionomycin,10μg/ml Brefeldin A共处理5h。

阴性对照组Th0细胞：用10 µg/ml anti-mouse CD3ε mAb和2 µg/ml anti-mouse CD28 mAb包被48孔细胞培养板过夜，第二天洗板封闭后加入分选后的CD4+ T细胞，维持培养基为RPMI-1640 加 10 % FBS, 55 μM β巯基乙醇，10μg/mL anti-mouse IFNγ，10μg/mL anti-mouse IL-4 培养，48 小时开始每 12 小时观测细胞浓度，如果细胞密度很大，则将细胞分到新的孔中，并加以上培养液（不用添加 anti-mouse CD3ε和anti-mouse CD28 mAb）培养5天。

2、流式检测
收集细胞后用流式检测抗体染色上机
Biolegend 118904 PE anti-mouse FOXP3 Recombinant Antibody

Biolegend 102024 Alexa Fluor® 700 anti-mouse CD25 Antibody

store in separate containers to reduce the number of freeze-thaw cycles.