小鼠胃肠类器官解决方案

小鼠胃肠类器官解决方案

在生物医学研究领域，类器官技术的出现彻底改变了我们对器官发育、疾病机制和药物反应的理解。小鼠胃肠类器官作为这一技术的重要分支，已成为研究胃肠道生物学、疾病建模和药物筛选的强大工具。

 

还在为类器官“养不大、养不像”发愁？

我们替你配好了——类器官培养细胞因子的“黄金配方”！

 

小鼠正常胃类器官培养方案

小鼠胃类器官完全培养基制备：将基础培养基、细胞因子（1-6）及各类添加物按既定比例混合，配制成完全培养基。

1、原代

（1）在超净台里快速剖开小鼠腹腔，取出胃组织，置于预冷PBS（加青霉素、链霉素、原代抗生素）中，剪开胃，冲洗内容物，剥离外层脂肪和血管。

（2）将清洗后的组织块收集到1.5ml EP管中，使用无菌尖头眼科手术剪将组织块尽量剪碎(匀浆状）。组织剪切程度与消化时间相关，剪切程度越高则消化时间越短，将剪碎后的组织转移至15ml无菌离心管中。

（3）加10倍体积的组织消化液消化，37℃震荡10-30min，消化过程中随时观察情况，当视野中观察到有大量细胞漏出，且大部分细胞呈细胞团块时，可终止消化（注：不要消化到单细胞状态）。

（4）在确认消化完成的组织悬液中，加入胎牛血清（FBS）至终浓度达2-5%或终浓度为0.1%的BSA后吹打混匀。

（5）将组织与细胞悬液过70µm细胞滤网，将过滤后的细胞悬液1000rpm，离心5min，离心后去上清。

（6）若离心后沉淀中观察到明显的红色沉淀（红细胞），加入2ml红细胞裂解液，吹打混匀后放置3min。 1000rpm 离心5min后，弃上清。

（7）适量基础培养基或PBS重悬沉淀。

（8）以合适的比例混合基质胶和隐窝，24孔细胞培养板为例，每孔点胶25-30ul基质胶混合物进行铺板（4℃下操作）。

（9）将铺好的培养板放入37℃培养箱中20-30min成胶，添加适量小鼠胃类器官完全培养基（恢复室温）进行培养。

2、类器官传代培养

（1）移液枪吸去培养基，每孔添加1-2ml 4℃ PBS，放置2min。

（2）移液枪轻柔吹打基质胶，收集在15ml离心管中，PBS定容到10-14ml ，4℃静置20-30min，每3-5孔为一组。1000rpm离心5min弃去液体，保留沉淀。

（3）添加适量基质胶重悬类器官，每孔25-30ul基质胶铺在24孔细胞培养板中，放置培养箱中20-30min成胶，添加适量小鼠胃类器官完全培养基。

3、类器官冻存

（1）移液枪吸去培养基，每孔添加1-2ml 4℃ PBS，放置2min。

（2）移液枪轻柔吹打基质胶，收集在15ml离心管中，PBS定容到10-14ml ，4℃静置20-30min，每3-5孔为一组。1000rpm离心5min弃去液体，保留沉淀。

（3）添加适量类器官冻存液，轻柔吹打重悬，以24孔细胞培养板为例，密度为2-3个孔冻存1管，每管体积1ml。

（4）做好标记信息，进行程序降温后，移入液氮长期保存。

4、类器官复苏

（1）取10ml DMEM/F12基础培养基于15ml离心管中。

（2）从液氮罐中取出冻存的类器官，快速置于 37℃水浴锅中融解。
（3）水浴融解过程中，需轻轻摇动冷冻管，以确保冻存液在 1-2min内完全融解。
（4）将溶解后的类器官快速转移至15ml 离心管，使用移液器轻轻吹打6-8次，1000rpm离心 5min，然后除去上清液并收集类器官沉淀。

（5）基质胶重悬，每孔25-30ul基质胶铺在24孔细胞培养板中，放置培养箱中20-30min成胶，添加适量小鼠胃类器官完全培养基。

结果展示（P8 D3）：

货号	产品名称	规格	目录价	首单7折
UA090042	Gastric Organoids Cytokine Set, Mouse/小鼠正常胃类器官细胞因子套装	100ml体系 （S规格）	3480	2436
		100ml体系（M规格）	15900	11130

注：限时优惠2025.12.31止

 

小鼠正常小肠类器官培养方案

小鼠小肠类器官完全培养基制备：将基础培养基、细胞因子（1-4）及各类添加物按既定比例混合，配制成完全培养基。

1、原代

（1）在超净台里将鼠小肠组织完整取下，放在预冷的PBS（加青霉素、链霉素、原代抗生素）中,使用灭菌后的剪刀，将肠段沿纵向剪开，然后将其展开，肠腔朝上，用盖玻片刮肠道杂质和残留物，来回两三下，用预冷的PBS冲洗小肠。

（2）用镊子捏着小肠的一端，用剪刀剪成小段，3-5mm左右，收集转移至50ml无菌离心管中，再加入预冷的PBS洗两三遍。

（3）离心管中加入30ml的5mM EDTA/PBS溶液（30mlPBS+300ul 0.5M EDTA）,小肠组织放入离心管中消化， 4℃摇床消化20-30min，期间经常镜检观察情况，有隐窝脱落为终止消化的信号，总消化时间不要超过40min。

（4）弃去消化液，加入预冷的PBS，轻轻摇晃去除EDTA。

（5）加入30ml预冷PBS含有0.1%的BSA，涡旋震荡让隐窝从小肠上掉下来。

（6）保留上清，过70µm细胞滤网，将过滤后的细胞悬液均匀的分到两个15ml离心管中，1000rpm，离心5min，离心后去上清。

（7）重复步骤5-6，2次，增加获得的隐窝数量。

（8）适量基础培养基或PBS重悬沉淀。

（9）以合适的比例混合基质胶和隐窝，24孔细胞培养板为例，每孔点胶25-30ul基质胶混合物进行铺板（4℃下操作）。

（10）将铺好的培养板放入37℃培养箱中20-30min成胶，添加适量小鼠小肠类器官完全培养基（恢复室温）进行培养。

2、类器官传代培养

（1）移液枪吸去培养基，每孔添加1-2ml 4℃ PBS，放置2min。

（2）移液枪轻柔吹打基质胶，收集在15ml离心管中，PBS定容到10-14ml ，4℃静置20-30min融胶，每3-5孔为一组。1000rpm离心5min弃去液体，保留沉淀。

（3）添加适量基质胶重悬类器官，每孔25-30ul基质胶铺在24孔细胞培养板中，放置培养箱中20-30min成胶，添加适量小鼠小肠类器官完全培养基。

3、类器官冻存

（1）移液枪吸去培养基，每孔添加1-2ml 4℃ PBS，放置2min。

（2）移液枪轻柔吹打基质胶，收集在15ml离心管中，PBS定容到10-14ml，4℃静置20-30min融胶 ，每3-5孔为一组。1000rpm离心5min弃去液体，保留沉淀。

（3）添加适量类器官冻存液，轻柔吹打重悬，以24孔细胞培养板为例，密度为2-3个孔冻存1管，每管体积1ml。

（4）做好标记信息，进行程序降温后，移入液氮长期保存。

4、类器官复苏

（1）取10ml DMEM/F12基础培养基于15ml离心管中。

（2）从液氮罐中取出冻存的类器官，快速置于 37℃水浴锅中融解。

（3）水浴融解过程中，需轻轻摇动冷冻管，以确保冻存液在 1-2min内完全融解。

（4）将溶解后的类器官快速转移至15ml 离心管，使用移液器轻轻吹打6-8次1000rpm 离心 5min，然后除去上清液并收集类器官沉淀。

（5）基质胶重悬，每孔25-30ul基质胶铺在24孔细胞培养板中，放置培养箱中20-30min成胶，添加适量小鼠小肠类器官完全培养基。

结果展示（P4 D1）：

货号	产品名称	规格	目录价	首单7折
UA090043	Small Intestinal Organoids Cytokine Set, Mouse/小鼠正常小肠类器官细胞因子套装	100ml体系 （S规格）	3800	2660
		100ml体系（M规格）	18800	13160

注：限时优惠2025.12.31止

 

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