荧光细胞活力检测试剂盒：简单、灵敏、兼容多重检测

一、 什么是荧光细胞活力检测？

 

荧光细胞活力检测是一种利用荧光染料或探针来定量分析细胞群体中活细胞数量和比例的高灵敏度技术。与传统的显色法（如MTT）相比，它通常具有更高的灵敏度、更宽的线性范围和更好的兼容性，特别适用于高通量筛选和多重检测。

 

其核心思想是：利用活细胞特有的代谢活性或完整的细胞膜，将非荧光的底物转化为荧光产物，或允许特定的荧光染料进入细胞并积累，从而通过检测荧光信号的强度来间接反映细胞的活力状态。

 

二、 核心工作原理

 

荧光细胞活力检测主要基于以下两种机制：

 

1. 基于代谢活性：
   
   

   • 原理： 活细胞内的酯酶活性很高。检测试剂中含有一种非荧光、可穿透细胞膜的底物（如乙酸盐衍生物）。当这种底物进入活细胞后，会被细胞内的酯酶水解，产生不能穿透细胞膜的荧光分子，从而被“困”在活细胞胞质内。
     
     

   • 结果： 荧光信号的强度与样品中活细胞的数量成正比。死细胞由于酯酶活性丧失或细胞膜不完整，无法有效积累荧光产物。
     
     

2. 基于膜完整性：
   
   

   • 原理： 利用某些染料（如碘化丙啶，PI）只能通过死细胞破损的细胞膜进入细胞核，并与DNA结合后发出强烈荧光的特性。
     
     

   • 结果： 通常与基于代谢活性的染料联用，可以同时检测活细胞和死细胞，实现更全面的细胞状态分析。
     
     

三、 主要优势

• 高灵敏度： 荧光信号远比颜色变化敏感，可以检测到更少数量的细胞或更微弱的活力变化。
  
  

• 宽动态范围： 荧光信号的线性范围很宽，允许在很大跨度的细胞浓度内获得准确数据，无需多次稀释样品。
  
  

• 兼容高通量： 非常适合96、384甚至1536孔板，易于实现自动化，是药物筛选的理想选择。
  
  

• 适合多重检测： 可以使用不同激发/发射波长的荧光探针，在同一孔中检测多个参数（如同时检测活细胞、死细胞和细胞凋亡）。
  
  

• 均质检测： 大多数试剂是“加样-混合-检测”的一步式操作，无需洗涤步骤，省时省力。
  
  

 

荧光细胞活力检测试剂盒的标准操作步骤

 

以UA-Glo® Fluorescent Cell Viability Assay为例

 

1.细胞准备

 

1)在96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的待检测细胞，建议使用黑框透明细胞培养板。

 

2)将合适浓度的待检测化合物加到细胞板孔中。培养液中有机溶剂浓度保持在1%以下。根据实验需求继续培养合适的时间。

 

2.细胞活力检测

 

1)取出荧光细胞活力检测试剂，CTF缓冲液完全溶解后平衡至室温。CTF底物涡旋振荡使其彻底混匀，瞬时离心收集CTF底物至管底 。

 

2)配制CTF反应液：CTF底物为100x，根据用量用CTF缓冲液配成1x反应液，充分混匀。

 

3)取出待测细胞培养板，每孔加入等体积的CTF反应液，例如100μl培养液加入100μl 1x CTF反应液 。

 

4)低速振板20 秒混匀，避光37 ℃ 反应60min 后进行荧光检测 。不同细胞对CTF底物切割速度不同，最佳读板时间需根据细胞优化。最快可以在加入试剂30分钟后进行读板。一般在60分钟或更长时间后读板的结果信噪比更高。建议读板时间最长不超过3hr。

 

5)在荧光读板仪上读取荧光信号，激发光Ex 380-400nm，发射光Em 505nm。

 

6)根据需要，继续进行下游的多重分析，例如Caspases 3/7 细胞凋亡检测。