StartScript® 1st Strand cDNA Synthesis Kit

* V = A, G or C; N = A, G, C or T

1. 将RNA模板变性处理

在RNase-free离心管中配制如下混合液：

在70°C下将RNA变性5分钟，短暂离心，立即放入冰中。这一步是可选的。然而，它可以提高长信使RNA和GC含量丰富的RNA区域的cDNA产量。

2. 配制第一链cDNA合成反应液

用移液器轻轻吹打混匀。

3. 按下列条件进行第一链cDNA合成反应

将20 μl cDNA合成反应在42℃下孵育1小时。如果使用随机引物混合物，建议在42°C孵育前在25°C孵育5分钟。在80°C下使酶失活5分钟。cDNA产物应保存在-20°C。一般情况下，cDNA产物的体积不应超过PCR反应体积的1/10。

1. 使用DEPC处理研究中使用的所有设备，或购买经证明无核酸的设备。在研究过程中戴上手套，并经常更换，以避免RNA酶污染。
2. 确保所用试剂中没有RNA酶污染。
3. 为了保证逆转录反应的有效进行，有必要使用高质量的RNA模板。
4. Poly (A)+ mRNA不需要从总RNA中分离，但使用Poly (A)+ mRNA作为模板可以提高最终产物的产率和纯度。RNA的使用量，总RNA小于5 μg；Poly (A)+ RNA含量小于1 μg；特异性RNA小于0.5 μg。
5. cDNA产物应保存在-20°C。
6. 实验操作时应将酶放在冰上，实验结束后保存在-20°C。