O-Glycoprotease

仅供参考：

• 将10µg糖蛋白与20 mM Tris-HCl pH 8.0, 40 mM DTT, 0.1% SDS溶液混合，并使得总体积为50µl。
• 95°C加热10分钟。
• 冷却至室温。
• 加入3µl 500mM 碘乙酸溶液。
• 室温放置30分钟。
• 将溶液转移至超滤离心管中。
• 12000 x g 离心4分钟，弃去流穿。
• 加入400µl 20mM Tris-HCl，pH 8.0溶液。
• 12000 x g 离心4分钟，弃去流穿。加入400µl 20mM Tris-HCl，pH 8.0溶液，重复一次。
• 加入20µl 20mM Tris-HCl，pH 8.0溶液。
• 加入1µl O糖蛋白酶，轻柔混匀。
• 37˚C孵育2-18小时。
• 12000 x g 离心4分钟，收集上清。