Tissue Digestion Kit

小鼠心脏组织的消化，仅供参考：

• 将试剂盒中的重组胶原酶混合组分和重组猪胰蛋白酶两种溶液解冻后在无菌状态下按照按体积比1：4混合，配制成消化液，如需进一步稀释，可采用HBSS或者PBS缓冲液进行稀释。
• 将小鼠心脏从组织保存液中取出，分别置于预冷的PBS（+2%青链双抗），洗涤2-3次。
• 将组织上多余部分去除（如结缔组织，脂肪组织等）。
• 将小鼠心脏剪碎（约3mm3），将移入离心管中，加入消化液1.5ml，37℃消化20分钟，每间隔10分钟左右移液枪吹打或颠倒混匀，使组织充分消化。此过程中需仔细检测消化情况，避免过度消化，必要时可对消化悬液进行镜检，以镜下观察到较多单细胞或较小的细胞簇（＜70µm）为宜。
• 将消化悬液静置片刻，收集上清，在沉淀中加入1.5ml消化液，37℃消化20分钟，每间隔10分钟左右用移液枪吹打或颠倒混匀，使组织充分消化。
• 重复上述步骤一次。
• 合并收集的上清，加入5ml DMEM完全培养基终止消化，4℃，300g离心5分钟，弃上清。
• 用5ml PBS（+1% 青链双抗）重悬细胞沉淀，过70µm细胞筛，4℃，300g离心5分钟。
• 用5ml PBS（+1% 青链双抗）重悬细胞沉淀，4℃，300g离心5分钟，弃上清。
• 用适当体积的DMEM完全培养基重悬细胞沉淀，置于细胞培养皿中培养。
  

如果需要更多的细胞团块而不是单细胞，建议缩短消化时间或者减少胰蛋白酶的比例；

本品尽量避免反复冻融，如有剩余建议-20℃分装保存