UA-Glo® Plus Luminescent Kinase Assay

产品组成: 荧光素酶，荧光素，缓冲液混合后灌装于10 ml 或100 ml的棕色瓶中，规格如下：

1. 激酶反应
1)   在96孔或384孔白不透明实验板中进行激酶反应。建议96孔板反应体积为50μL，384孔板反应体积为10μL。可以在激酶反应中加入浓度梯度的测试化合物。
2)   激酶反应的激酶和底物浓度需要根据不同的激酶进行优化。在实验所需的适当信噪比的情况下，可以采用在信号线性反应范围的激酶浓度进行实验。
3)   ATP的浓度: UA-Glo 激酶Plus发光检测试剂盒最高可至100μM。
4)   激酶反应可以在通用反应缓冲液中进行（40mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 mg/ml BSA, 20mM MgCl2）或采用文献报道的反应缓冲液和辅助因子。
5)   激酶反应的温度和时间需根据不同激酶而设定。进行化合物高通量筛选实验时，建议优化激酶反应于室温(22℃-25℃)进行，以利于在激酶活性测定过程中保持实验板的温度均一性。

2. 激酶活性测定
1)   取出UA-Glo 激酶Plus发光检测试剂，平衡至室温。轻摇混匀。激酶活性发光检测试剂中的荧光素酶反应对温度变化敏感，试剂和实验板需要平衡到室温，测试过程温度保持恒定(±1℃)。
2)   如果激酶反应是在非室温，例如30℃进行的，实验板需平衡至室温。
3)   加50 µL的激酶发光检测试剂到 50 µL 96孔实验板中, 或10 µL激酶发光检测试剂到10 µL 384 孔实验板中，振荡混匀，放置暗处10分钟。
4)   读取荧光信号。由于荧光信号非常稳定，如有需要，可以在加入检测试剂后3小时内读板。

1) 非经严格验证，不建议随意改变反应试剂用量。激酶反应和UA-Glo激酶发光检测试剂的体积比应为1：1。

2) 首次使用UA-Glo 激酶发光检测试剂后应分装并于负20℃储存，保证试剂的稳定性。反复冻融4次信号强度无损失。

3) 本产品仅作科研用途。