UA-Glo® Nano luciferase Lytic Detection System

裂解缓冲液，底物，分裂酶大片段分别灌装于棕色瓶及2ml的螺旋管中，规格如下：

1.在96孔或384孔细胞培养板铺合适密度的待检测细胞，转染合适的带分裂酶小片段的质粒或带有相关表达载体的稳定细胞株。建议使用白板。
2.根据项目需求对细胞进行相关处理，并继续培养合适的时间。
3.取出检测裂解缓冲液，在室温平衡20分钟。快速spin 底物管及分裂酶大片段管 （用户自供，最佳浓度需优化） 10秒钟，将内容物收集于管底，放置在冰盒上。
4.取出待测细胞培养板，在室温平衡20分钟。
5.准备检测试剂：根据实验需求确定配制的试剂量。配制时先将底物加到裂解缓冲液中，充分混匀，再加入分裂酶大片段 （用户自供） ，充分混匀。底物是100x，分裂酶大片段是50x，使用前用裂解缓冲液稀释成1x的检测工作液。注意避光。
6.加等体积1x检测工作液到96或 384 孔板细胞中，轻轻振荡30秒钟，放置暗处继续裂解3～5分钟。
7.在luminescence 读板仪上读取荧光信号。保存数据，进行数据处理分析。
8.未使用完的试剂放回-20℃冰箱保存。

1.试剂量：非经严格验证，不建议随意改变反应试剂用量。

2.读板时间：请按说明书推荐时间进行读板，建议在10-30分钟内完成读板以获得最佳结果。

3.板间内参：如果需要进行板间数据比较，建议在所有反应板均设立两孔未加化合物的阳性对照作为板间内参，用板间内参读数对每块板读数先进行纠正（normalization），纠正后的数据再进行下游处理分析。

4.反应板：荧光读数高低可能对临近周围孔读数形成明显干扰，主要是荧光信号外溢。建议使用透明底的白板。

5.试剂混合：不同批次的试剂，已经启用但未使用完而储存试剂及条件差别比较明显的试剂，不建议混合后使用。

6.分装储存：按照说明书分装储存反应试剂，保证试剂的稳定性。