Phi29 Polymerase RCA Kit

1. 如下表格所示，在不添加酶的情况下准备反应。通过移液或涡旋充分混合，但应轻柔。短暂离心以收集溶液至管底。

2. 在热循环仪中孵育，盖子设定为100°C，在95°C下孵育3分钟。然后让样品冷却至室温。
3. 将样品放在冰上，并向每个样品中加入2 µl的Phi29 DNA聚合酶。通过移液器或涡旋充分混合，但动作要轻柔。短暂离心以收集溶液到管底。
4. 在热循环仪中孵育，盖子设置在≥75°C，在30°C下孵育2小时，然后在65°C下孵育10分钟以灭活DNA聚合酶。RCA产物可以保存在4°C过夜或在-20°C长期储存。

1. RCA 扩增是利用 phi29 DNA 聚合酶链置换活性和持续合成能力的特性，对环状模板进行放大扩增。因此，其最佳底物为环状 ssDNA 或 dsDNA 模板（C-DNA）。除此外，其对分子量较大的线性模板（L-DNA）同样可以持续合成和放大扩增，如genomic DNA，此时其扩增放大比例弱于C-DNA 的扩增。

2. 由于高产量的高分子量DNA，RCA产品可能具有粘性。在使用任何下游应用之前，建议用无核酸酶水进行双倍稀释。