Fast ligation Kit

1. 在Nuclease-Free离心管中配制如下混合液：

2. 摩尔浓度的计算：
摩尔浓度 = [(µg/µl) ÷ (碱基对x 650 daltons)] x 2
3. 将混合液轻轻吹打混合均匀并瞬时离心。
4. 将混合液静置于室温(25℃)5-10min。
5. 取1-5μl反应液转入50μl感受态细胞内进行后续实验，或储存于-20℃。

1. 快速连接酶最后加入。

2. 快速连接缓冲液应提前在室温下解冻并上下摇晃混合均匀。

3. 载体与插入DNA的最佳摩尔比为1:3。

4. 对于载体单酶切插入外源片段的情况，需注意对载体进行脱磷处理，以避免质粒自连。

5. 实验操作时应将酶制品放在冰上，实验结束后立即保存在 -20°C。