StartScript® One Step RT-PCR Kit
- 价格: ¥450
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产品组分
Component
UA070126-50 Rxns
UA070126-250 Rxns
One-Step Enzyme Mix (25X)
100 μl
5 × 100 μl
One-Step Reaction Mix (2X)
2 × 625 μl
10 × 625 μl
RNase Free dH2O
2 × 1 ml
10 × 1 ml
操作步骤
1. 在Rnase-free离心管中配制如下混合液:
Component
Volume
One-Step Enzyme Mix (25X)
2 μl
One-Step Reaction Mix (2X)
25 μl
Gene-specific Forward Primer (10 μM)
2 μl
Gene-specific Reverse Primer (10 μM)
2 μl
Template RNA (1 pg~1 μg)
x μl
Rnase Free dH2O
Up to 50 μl
用移液器轻轻吹打混匀。
2. 按下列条件进行RT-PCR反应Step
Temperature
Time
Number of Cycles
Reverse Transcription*
48°C
30 minutes
1 cycle
Initial Denaturation
94°C
3 minutes
1 cycle
Denaturation
Annealing**
Extension
94°C
50-65°C
72°C
30 seconds
30 seconds
1 minutes
25–35 cycles
Final Extension
72°C
5 minutes
1 cycle
Soak
4°C
Indefinite
1 cycle
*如果模板具有复杂二级结构或高GC区域,可将反应温度提高至55℃,有助于提高产量。
**退火温度需要根据引物退火温度调整,一般设置成低于引物退火温度1 ~ 2℃即可。注意事项
1. 使用DEPC处理研究中使用的所有设备,或购买经证明无核酸的设备。在研究过程中戴上手套,并经常更换,以避免RNA酶污染。
2. 确保所用试剂中没有RNA酶污染。
3. 通常情况,28~30个循环可达到最佳扩增,对于低拷贝目的基因的检测,可将循环数增加到40个。
4. 使用本试剂盒进行反转录反应时必须使用特异性的反转录引物,Random Primer、Oligo dT Primer不能使用。
5. 实验操作时应将酶制品放在冰上,实验结束后立即保存在 -20°C。
- 产品数据
生物活性
使用不同量的HEK293T总RNA为模板,检测β-actin基因197bp的DNA片段。在50μl反应体系中加入指定量的本产品或T公司(Competitor) 的类似产品进行RT-PCR扩增后的电泳效果图。如图所示,本产品与T公司的产品相比,具有较一致的检测灵敏度,对RNA的敏感检测低至1 pg,且具有更好的专一性和扩增效率。
M: DL2000 DNA Marker;
CK: 未添加Enzyme Mix;
Lane 1: 1ug;
Lane 2: 100ng;
Lane 3: 10ng;
Lane 4: 1 ng;
Lane 5: 100pg;
Lane 6: 10pg;
Lane 7: 1pg;
Lane 8: 0.1 pg;
| 货号 | 产品名称 | 种属 | 表达系统 | 数量 |
|---|
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