1.用预冷的 PBS 洗涤细胞两次,然后用1× Binding Buffer重悬所需数量的细胞,调整浓度为1 x 10^6细胞/毫升。
2.取 100 µL 细胞悬液(含1 x 10^5 cells个细胞)转移至 5 mL 流式检测管中。
3.向细胞悬液中加入 5 µL FITC Annexin V 和 1 µL碘化丙啶(PI)。对于荧光强度较高的样本,可将染料稀释 2 至 10 倍后使用。
4.轻轻涡旋混匀细胞,于室温(25°C)避光孵育 15 分钟。
5.使用200 µL 1× Binding Buffer洗涤细胞两次。
6.用 200 至 400 µL 的 Annexin V Binding Buffer重悬细胞。
7.在 1 小时内进行流式细胞仪分析。
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