UA-Myco Nest PCR Mycoplasma Detection Kit

巢式PCR支原体检测试剂盒

货号： UA079017

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产品介绍

巢式 PCR 支原体检测试剂盒包含即用引物 2 管和反应内参 1 管，规格如下：

规格	组分
25T	引物 P1 一管（50 μL），引物 P2 一管（50 μL），PCR 反应内参一管（50 μL）
50T	引物 P1 一管（100 μL），引物 P2 一管（100 μL），PCR 反应内参一管（100 μL）

1. 待测细胞培养基准备

1) 从对数生长期的细胞培养中取1mL细胞培养基。

2) 细胞培养基室温离心200g，5分钟。将大约800μL培养基转到新的离心管中，注意不要带入离下的细胞碎片

3) 用以上准备的细胞培养基作为巢式PCR的模板进行支原体检测。

2. 巢式PCR反应

1) 第一PCR反应：以通用的2XPCR预混液试剂为例：

PCR 反应组装（推荐冰上配制）

PCR 反应条件: 30 循环，条件见下表

2) 从第一PCR反应中取1μL作为第二PCR的模板并用引物P2进行第二PCR。第二PCR反应组装（推荐冰上配制）见下表。PCR反应条件同第一PCR反应。

3) 准备2%的琼脂糖胶。取10µl的第二PCR产物做DNA电泳。

3.结果

PCR反应内参为515bp单一DNA条带，常见支原体污染会产生236bp-365bp单一DNA条带，Acholeplasmalaidlawii污染会产生426bp和219bp的双DNA条带。