1.根据实验设计,将表达分泌型Luci/Gaussia荧光素酶报告基因的细胞,铺于96孔或384孔反应板。
2.根据实验要求对细胞进行化合物处理及报告基因刺激。
3.于报告基因刺激后适当时间,例如24~48小时,收集细胞上清液,进行荧光素酶活性分析。
4.实验前将UA-Luc 4 Luci/Gaussia荧光素酶检测试剂平衡至室温,轻摇混匀。
5.根据需要量配制对应体积的1x反应液。试剂盒中的底物为100x,使用前用缓冲液配成1x反应液。
6.向96-孔白色不透明板每孔加入20ml检测样本或对照样本,再向各孔加入50 ml检测试剂。
7.在振板机上低速振荡10秒钟。
8.立即在荧光读板仪上读取并记录荧光信号。
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