在白色透明底96孔或384孔细胞培养板接种合适密度的表达Beta-Gal的细胞。血清例如FBS 可能含有哺乳动物Beta-Gal, 建议用56℃,0.5hr灭活的FBS配制接种细胞的完全培养基。同一细胞板内建议设定不表达Beta-Gal的细胞孔或无细胞完全培养基孔作为Beta-Gal检测背景, 此背景检测读值可以用来校正实验读值。
根据实验需求进行细胞处理后进行Beta-Gal检测。
取出Beta-Gal检测试剂,完全溶解后平衡至室温(22℃-25℃),颠倒充分混匀。
取出细胞培养板,平衡至室温(22℃-25℃)。荧光素酶反应对温度变化敏感。试剂和测试样品/实验板需要平衡到室温,测试过程温度保持恒定(±1℃)。
细胞培养板每孔加入与孔内培养液等体积的Beta-Gal检测试剂,例如100μl培养液加入100μl 检测试剂。
振板30 秒混匀,避光反应30min 后进行发光检测, 可以在3-5hr内读板。
数据处理: 多数实验可以直接用实验数据进行后续数据计算。如果背景较高,可以用实验数据减去背景数据 (无Beta-Gal 表达的细胞或无细胞完全培养基的读值), 用此背景校正的数据进行后续数据计算。
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