TR-FRET Human BCL-XL/CRBN PROTAC Binding Kit

货号： UA086017

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产品介绍

表1. 试剂与储存条件

组分	浓度	100TESTS	500TESTS	2500TESTS	10000TESTS	保存温度
Tag1-DDB1/CRBN protein	100×	4μL	20μL	100μL	400μL	-80℃
Tag2- BCL-XL protein	50×	10μL	40μL	200μL	800μL	-80℃
XZ739	1mM	5μL	10μL	50μL	200μL	-80℃
Anti-Tag1 Eu dye antibody	50×	10μL	50μL	250μL	1000μL	-80℃
Anti-Tag2 Ac antibody	12.5×	40μL	200μL	1000μL	4000μL	-80℃
Detection buffer	10×	400μL	2mL	10mL	40mL	-80℃

*试剂应避免反复冻融，建议首次解冻后进行分装按保存条件保存，有效期一年。

1试剂准备

使用前将所有试剂室温融化（室温平衡至少30min）。384浅孔板反应体系为20uL（反应体系试剂用量如表所示），在配制之前计算实验所需体积，按需配制；以下配制仅供参考，以500次为例。

1.1 缓冲液（1×）配制

2mL Detection buffer （10×）中加入18mL无菌水，混匀备用

表2. 试剂配置及用量

试剂名称	配置	用量（μL）
Tag1-DDB1/CRBN protein	取20μL Tag1-DDB1/CRBN protein原液，1× Detection buffer稀释至2mL ,混匀备用。	4
Tag2- BCL-XL protein	取40μL Tag2- BCL-XL protein原液，1×Detection buffer稀释至2mL ,混匀备用。	4
XZ739	按照反应体系，化合物用1×Detection buffer稀释到待测浓度。保证所有检测孔中DMSO的含量一致。	2
Antibody Mix	取50μL Anti-Tag1 Eu dye antibody 原液，加入 1×Detection buffer 2.45mL, 混匀；取200μL Anti-Tag2 Ac antibody 原液，加入 1× Detection buffer 2.3mL, 混匀，1:1混合为Antibody Mix。	10

1.2 待测标准品2倍梯度稀释

以XZ739为例，稀释液为1×Detection buffer，为降低基质效应干扰，推荐使用与待测样品基质相同的溶液稀释；且待测样本根据实际浓度调整。

表3. 样品梯度稀释

2 加样及对照

2.1 实验孔加样顺序：4μL Tag1-DDB1/CRBN protein，4μL Tag2- BCL-XL protein，2μL XZ739 或待检测样本，10μL混匀的Antibody Mix，依次加入384浅孔板中。

2.2 阴性对照孔（Blank）：XZ739 或待检测化合物替换为2uL相同百分含量的DMSO溶液。

2.3 质控孔：15uL Detection buffer加5uL稀释后的Anti-Tag1 Eu dye antibody。

表4. 加样及对照

	阴性对照	阳性对照	样本	NC
第一步	2μL 1× Detection buffer稀释的DMSO	2μL 10μM XZ739	2μL 梯度稀释待测样本	15μL 1× Detection buffer 加5μL 1×Anti-Tag1 Eu dye antibody
	4μL Tag1-DDB1/CRBN protein
	4μL Tag2- BCL-XL protein
第二步	10μL Antibody Mix
	用封板膜封住板孔，室温孵育过夜；

*阴性对照和NC，推荐使用与待测样品基质相同的溶液替代1×Detection buffer。

3.检测

在兼容TR-FRET的酶标仪上检测（激发光为320nm，检测620nm和665nm的发射波长）。

【结果计算】

1. 计算信号值：665nm荧光信号比620nm荧光信号再乘以10000，即

信号值= (665/620)*10000

2. 根据信号值计算Net Signal值：

Net Signal值= (Std-NC)/NC*100

3.计算CV（%）

CV（%）= Standard Deviation/Mean Ratio×100%

【数据示例】

以下数据不能代替实验中获得的数据，只作为示例，结果可能因TR-FRET兼容仪器而异。