TR-FRET Human Epigeneous Bromodomain Binding Kit

表1. 试剂盒组分及保存条件

*试剂应避免反复冻融，建议首次解冻后进行分装按保存条件保存，有效期一年。

1试剂准备

使用前将所有试剂室温融化（室温平衡至少30min）。384浅孔板反应体系为20uL（反应体系试剂用量如表所示），在配制之前计算实验所需体积，按需配制；以下配制仅供参考，以500次为例。

1.1 缓冲液（1×）配制

2mL Detection buffer （10×）中加入1.8mL无菌水，混匀备用

表2. 试剂配置及用量

1.3 待测样品或标准品梯度稀释

以(+)-JQ-1（JQ-1）为例，稀释液为1× Detection buffer，为降低基质效应干扰，推荐使用与待测样品基质相同的溶液稀释；且待测样本根据实际浓度调整。

表3. 样品梯度稀释

2 加样及对照

2.1 实验孔加样顺序：4μL Tag1-BRD4 protein，4μL Tag2- peptide protein，2μLJQ-1 或待检测样品，10uL混匀的Antibody Mix，依次加入384浅孔板中。

2.2 最大值对照孔（Blank）： 4μL Tag1-BRD4 protein，4μL Tag2- peptide protein，2μL含1%DMSO的1×Detection Buffer，10uL混匀的Antibody Mix，依次加入384浅孔板中。

2.3 最小值对照孔：4μL Tag1-BRD4 protein，4μL Tag2- peptide protein，2μL3000nM JQ-1，10uL混匀的Antibody Mix，依次加入384浅孔板中。

2.4 质控孔：15uL 1×缓冲液加5μL稀释后的Anti-Tag1 Eu Antibody Mix。

表4. 加样及对照

*对照和NC，推荐使用与待测样品基质相同的溶液替代1×Detection buffer。

3.检测

在兼容TR-FRET的酶标仪上检测（激发光为320nm，检测620nm和665nm的发射波长）。

【结果计算】

1. 计算信号值：665nm荧光信号比620nm荧光信号再乘以10000，即

信号值= (665/620)*10000

2. 根据信号值计算δ值：

δ值= (Std-NC)/NC*100

3.计算CV（%）

CV（%）= Standard Deviation/Mean Ratio×100%

【数据示例】

以下数据不能代替实验中获得的数据，只作为示例，结果可能因TR-FRET兼容仪器而异。