TR-FRET Human BCL-XL/VHL PROTAC Binding Kit

表1. 试剂与储存条件

*试剂应避免反复冻融，建议首次解冻后进行分装按保存条件保存，有效期一年。

1试剂准备

使用前将所有试剂室温融化（室温平衡至少30min）。384浅孔板反应体系为20uL（反应体系试剂用量如表所示），在配制之前计算实验所需体积，按需配制；以下配制仅供参考，以500次为例。

1.1 缓冲液（1×）配制

2mL Detection buffer （10×）中 加入18mL无菌水，混匀备用

表2. 试剂配置及用量

1.2 待测标准品2倍梯度稀释

以BCL-XL DEGRADER-2为例，稀释液为1×Detection buffer，为降低基质效应干扰，推荐使用与待测样品基质相同的溶液稀释；且待测样本根据实际浓度调整。

表3. 样品梯度稀释

2 加样及对照

2.1 实验孔加样顺序：4μL Tag1-VHL protein，4μL Tag2- BCL-XL protein，2μL BCL-XL DEGRADER-2 或待检测样本，10μL混匀的Antibody Mix，依次加入384浅孔板中。

2.2 阴性对照孔（Blank）：BCL-XL DEGRADER-2 或待检测化合物替换为2uL相同百分含量的DMSO溶液。

2.3 质控孔：15uL Detection buffer加5uL稀释后的Anti-Tag1 Eu dye antibody。

表4. 加样及对照

*阴性对照和NC，推荐使用与待测样品基质相同的溶液替代1×Detection buffer。

3.检测

在兼容TR-FRET的酶标仪上检测（激发光为320nm，检测620nm和665nm的发射波长）。

【结果计算】

1. 计算信号值：665nm荧光信号比620nm荧光信号再乘以10000，即

信号值= (665/620)*10000

2. 根据信号值计算Net Signal值：

Net Signal值= (Std-NC)/NC*100

3.计算CV（%）

CV（%）= Standard Deviation/Mean Ratio×100%

【数据示例】

以下数据不能代替实验中获得的数据，只作为示例，结果可能因TR-FRET兼容仪器而异。