产品中心药物靶点和Fc受体药物筛选试剂盒

Human VAV1/CRBN PROTAC Binding Kit

货号： UA086022

Datasheet COA

价格： ￥13,080
规格：
500T2500T10000T
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产品介绍

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操作详情

产品组分

表1. 试剂盒组分及保存条件

组分	浓度	500 TESTS	2500 TESTS	10000 TESTS	保存温度
Tag1-DDB1/CRBN protein	200×	10μL	50μL	200μL	-80℃
Tag2- VAV1 protein	100×	20μL	100μL	400μL	-80℃
MRT-6160 （200μM）	100×	10μL	50μL	200μL	-80℃
Anti-Tag1 Eu dye antibody	50×	50μL	250μL	1000μL	-80℃
Anti-Tag2 Ac antibody	100×	25μL	125μL	500μL	-80℃
Detection buffer	10×	2mL	10mL	40mL	-80℃

*试剂应避免反复冻融，建议首次解冻后进行分装按保存条件保存，有效期一年。

操作步骤

1试剂准备

使用前将所有试剂室温融化（室温平衡至少30min）。384浅孔板反应体系为20uL（反应体系试剂用量如表所示），在配制之前计算实验所需体积，按需配制；以下配制仅供参考，以500次为例。

1.1 缓冲液（1×）配制

2mL Detection buffer （10×）中加入18mLddH₂O，混匀备用

表2. 试剂配置及用量

试剂名称	配置	用量（μL）
Tag1-DDB1/CRBN protein	取10μL Tag1-DDB1/CRBN protein原液，1× Detection buffer稀释至2mL ,混匀备用。	4
Tag2- VAV1 protein	取20μL Tag2- VAV1 protein原液，1×Detection buffer稀释至2mL ,混匀备用。	4
MRT-6160 （200μM）或待测药物	按照反应体系，化合物用1×Detection buffer稀释到待测浓度。保证所有检测孔中DMSO的含量一致。	2
Antibody Mix	取50μL Anti-Tag1 Eu dye antibody，用Detection buffer稀释至2500μL，混匀；取25μL Anti-Tag2 accepter antibody，用Detection buffer稀释至2500μL，混匀，1:1混合为Antibody Mix。	10

1.2 待测样品梯度稀释

使用1×Detection buffer进行待测样品和标准品的配制。若样品的储液为DMSO，建议保持体系中DMSO 含量一致，(检测缓冲波中不含DMSO，请根据标准品或待测样品稀释情况向1×Detection buffer中添加DMSO)目最高不超过2%。试剂盒中MRT-6160 标准品为10mM DMSO 母液。请根据实验情况配制标准品总量，以下内容仅供参考。

表3. MRT-6160梯度稀释

	MRT-6160终浓度（nM）	MRT-6160配制浓度（nM）	配置方法
①	200	2000	5μL 200μM 母液+495μL 1× Detection buffer
②	100	1000	50μL ① +50μL 1× Detection buffer (1%DMSO)
③	50	500	50μL ② +50μL 1× Detection buffer (1%DMSO)
④	25	250	50μL ③ +50μL 1× Detection buffer (1%DMSO)
⑤	12.5	125	50μL ④ +50μL 1× Detection buffer (1%DMSO)
⑥	6.25	62.5	50μL ⑤ +50μL 1× Detection buffer (1%DMSO)
⑦	3.125	31.25	50μL ⑥ +50μL 1× Detection buffer (1%DMSO)
⑧	1.56	15.63	50μL ⑦ +50μL 1× Detection buffer (1%DMSO)
⑨	0.78	7.81	50μL ⑧ +50μL 1× Detection buffer (1%DMSO)
⑩	0.39	3.91	50μL ⑨ +50μL 1× Detection buffer (1%DMSO)
Blank	0	0	100μL 1× Detection buffer (1%DMSO)

2 加样及对照

2.1 实验孔加样顺序：4μL Tag1-DDB1/CRBN protein，4μL Tag2- VAV1 protein，2μL MRT-6160 或待检测样品，10uL混匀的抗体Mix（Anti-Tag1 Eu dye antibody和Anti-Tag2 accepter antibody 1:1混匀），依次加入384浅孔板中。

2.2 阴性对照孔（BACnk）：与待测样本相同百分含量的DMSO溶液。

2.3 NC：16μL 1× Detection buffer加4μL稀释后的Anti-Tag1 Eu dye antibody。

表4. 加样及对照

	阴性对照	阳性对照	样本	NC
第一步	2μL 1× Detection buffer稀释的DMSO（1%DMSO）	2μL 2μM MRT-6160	2μL 梯度稀释待测样本	15μL 1× Detection buffer（1%DMSO）加5uL 1×Anti-Tag1 Eu dye antibody
	4μL Tag1-DDB1/CRBN protein
	4μL Tag2- VAV1 protein
	10μL Antibody Mix
第二步	用封板膜封住板孔，室温孵育2h。