肠激酶（ENTK）作为一种具有严格底物特异性的丝氨酸蛋白酶，在生物体内扮演着双重角色。在生理层面，它通过激活胰蛋白酶原调控消化道蛋白质消化；而在病理维度，其在 HeLa 等癌细胞线粒体中的特异性高表达，为癌症诊断提供了潜在生物标志物。然而，细胞内高浓度巯基生物分子（如谷胱甘肽）的干扰，以及线粒体靶向递送的技术壁垒，长期制约着肠激酶的精准检测。近年来，一种基于二硒化物修饰金纳米粒子的荧光传感器（AuNP@DSe-PlinkerTMR）的出现，为突破这一困境提供了创新性解决方案。
肠激酶的独特之处在于其对 DDDDK 多肽序列的专一识别能力，这种特性使其成为生物体内级联反应的 "分子开关"。在正常生理过程中，它是消化酶激活的关键启动子；而在肿瘤微环境中，线粒体肠激酶的异常高表达与癌细胞增殖、能量代谢重构密切相关，其表达水平可作为癌症进展的潜在监测指标。
现有检测方法（如 ELISA、HPLC）存在明显短板：难以实现线粒体原位检测，且受生物硫醇干扰严重。多数金纳米传感器依赖 Au-S 键修饰功能基团，而生物硫醇会竞争性结合金表面，导致传感器结构破坏和假阳性信号。同时，常规方法灵敏度不足，无法捕捉癌细胞内低丰度肠激酶的表达差异。
该传感器的核心突破在于采用二硒化物（-Se-Se-）键替代传统 Au-S 键。实验数据显示，在 10 mM 谷胱甘肽（远超生理浓度）环境中孵育 12 小时，Au-S 键修饰的传感器荧光信号增强 16.4 倍（提示结构解体），而 AuNP@DSe-PlinkerTMR 荧光强度几乎无变化，证实二硒化物键能有效抵御生物硫醇攻击，解决了长期困扰的稳定性问题。
传感器表面修饰的 DDDDK 多肽发挥双重作用：既是肠激酶的特异性底物，其羧基产生的负电荷又能与线粒体膜间隙的正电荷（H + 富集）形成静电吸引，实现主动靶向。共聚焦成像显示，传感器与线粒体染料的共定位系数达 0.91-0.96，远高于常规载体，确保了检测的空间特异性。
采用 "淬灭 - 激活" 设计：金纳米粒子淬灭表面荧光基团（TMR），当肠激酶存在时，特异性切割 DDDDK 序列使荧光基团脱离，信号恢复且强度与肠激酶浓度正相关，实现定量检测。
在生理条件下，该传感器展现三大特性：一是抗干扰能力突出，在高浓度谷胱甘肽或血清中对肠激酶的响应不受影响，而传统 Au-S 传感器信号降低 60% 以上；二是灵敏度高，检测限低至 0.18 U・mL⁻¹，满足低丰度检测需求；三是特异性强，对其他蛋白酶无交叉反应。
细胞实验中，AuNP@DSe-PlinkerTMR 在肠激酶高表达的 HeLa 细胞中呈现强荧光，在低表达的 MCF-7 细胞中信号微弱。即使在两种细胞共培养体系中，仍能清晰区分，荧光信号差异达 10.95 倍；而 Au-S 传感器因假阳性干扰，差异仅 2.51 倍。经生物硫醇清除剂处理后，该传感器信号无明显变化，进一步证实其检测的高保真度。
这种基于二硒化物修饰的纳米传感器，通过结构创新和靶向设计，成功解决了肠激酶检测中的稳定性和特异性难题，实现了线粒体原位、高灵敏、抗干扰的精准分析。其不仅为肠激酶研究提供了新工具，更开创了细胞器靶向检测的设计新思路。
未来通过优化响应速度和组织穿透性，有望在活体肿瘤成像、药物筛选等领域拓展应用，为癌症等疾病的早期诊断与精准治疗提供有力支撑，推动生物分析技术向更微观、更精准的方向发展。
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