按下炎症小体的暂停键------NEK7/NLRP3全流程试剂解决方案

NLRP3（NOD样受体家族含吡啉结构域蛋白3）炎症小体的异常激活已被证实是多种人类疾病的关键致病机制，涵盖动脉粥样硬化（Duewell et al., 2010）、痛风（Martinon et al., 2006）、多发性硬化（Inoue et al., 2012）、阿尔茨海默病（Halle et al., 2008）及多种恶性肿瘤（Kolb et al., 2014；Karki et al., 2017；Sekaran et al., 2024）。NLRP3炎症小体是一种胞质多蛋白复合物，由模式识别受体（PRR）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）及半胱天冬酶前体pro-caspase-1构成。其基因突变可引发Cryopyrin相关周期性综合征（CAPS），进一步凸显了深入研究其调控机制的重要性。

 

NLRP3的激活遵循典型的"两步模型"：首先由NF-κB介导的转录上调及翻译后修饰完成"启动"阶段，随后由次级刺激信号诱导炎症小体组装与激活（Bauernfeind et al., 2009；O'Keefe et al., 2024）。活化的caspase-1不仅剪切pro-IL-1β和pro-IL-18生成成熟炎症因子，还通过剪切gasdermin D（GSDMD）诱导细胞焦亡（pyroptosis），一种程序性、溶解性细胞死亡方式（Lamkanfi & Dixit, 2012）。

 

除NLRP3外，炎症小体家族还包括NLRP1、NLRC4、PYRIN及AIM2等成员，各自具有特定的激动剂和激活机制。例如，NLRC4通过NAIP蛋白识别细菌鞭毛蛋白，AIM2感应胞质双链DNA，而PYRIN则响应RhoA GTP酶抑制信号。这些多样化的激活方式体现了免疫系统对病原刺激的高度适应性与特异性。

 

鉴于NLRP3在多种炎症性疾病中的核心作用，其靶向抑制剂的研发已成为药物发现的重要方向。MCC950（CRID3/CP-456773）作为首个高选择性NLRP3抑制剂，通过与NLRP3-NACHT结构域的Walker A基序结合，阻断其ATP酶活性，已在CAPS模型中展现出良好疗效（Coll et al., 2015）。尽管其衍生物如Inzomelid与Somalix已进入临床Ⅰ期，但潜在的肝毒性限制了其进一步开发。因此，研究者正积极探索结构新颖、机制多样的NLRP3抑制剂，包括RRx-001、OLT1177、曲尼司特（Tranilast®）及CY-09等。其中，SLC-3037通过阻断NEK7与NLRP3相互作用，提供了一种全新的干预策略（Park et al., 2023）。

近期研究表明，NIMA相关激酶7（NEK7）可能在不依赖其激酶活性的情况下，参与NLRP3炎症小体的正确组装与激活；因此，降低NEK7蛋白水平或可阻断NLRP3激活。鉴于NEK7含有一个甘氨酸β-发夹环结构去稳定信号（degron），该结构常见于多种被CRBN分子胶降解剂靶向的蛋白，诺华采用该策略降解NEK7，从而抑制NLRP3炎症小体。我们鉴定出NK7-902，一种可降解NEK7的CRBN分子胶降解剂。NK7-902可在人源原代单核细胞、外周血单个核细胞（PBMCs）及全血中强效且选择性地降解NEK7。Pipeline靠前的MRT-8102、CT-02等分子胶已迈入临床Ⅰ期。

 

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① 靶点确认 & 结合实验

 

重组人CRBN/DBB1蛋白（货号：UA080011, DDB1/CRBN Complex, His Tag Protein, UA BIOSCIENCE）

 

生物素标记重组人CRBN/DBB1（货号：UA080262，Biotinylated CRBN/DDB1 Protein，UA BIOSCIENCE）

 

重组人NEK7蛋白（货号：05-131，NEK7，Carnabio）

 

重组人NLRP3蛋白（货号：UA080513，NLRP3 Protein, Human，UA BIOSCIENCE）**

 

THUNDER™ TR-FRET tool box 蛋白互作试剂

 

	Europium	Acceptor
Anti His	EUHIS-1000	FRHIS-1000
Streptavidin	EUSA-1000	FRSA-1000
Anti GST	EUGST-1000	FRGST-1000

 

② 高通量细胞学筛选

 

NEK7降解及焦亡通路相关蛋白检测

 

	Human	Mouse
Anti-NLRP3 Rabbit Mab	S0B1123	S0B6440
Anti-NEK7 Rabbit Mab	S0B6365
Anti-ASC Rabbit Mab	S0B1370
Anti-GSDMD Rabbit Mab	S0B6191
Anti-Caspase-1 Rabbit Mab	S0B1231	S0B6382
Anti-pro Caspase-1 Rabbit Mab	S0B6378

 

3 h内完成"降解-寡聚-焦亡"三终点读数，Z′>0.8

 

炎症小体激活模型即用试剂

 

LPS（UA080443）+Nigericin（abs831133）+Sytox Green染料(abs47038985)

 

③ 特异性 & 反筛

 

TNF-α/IL-6/IL-1β检测

 

区分"NLRP3专属IL-1β↓"与"广谱NF-κB抑制"，轻松排除 pathway-toxic hits

 

	OneStep ELISA		TR-FRET
	Human	Mouse	Human	Mouse
TNF-α	S0C3024	S0C3023	KIT-TNFA-500	KIT-MTNFA-500
IL-6	S0C3004	S0C3019	KIT-IL6-500	KIT-MIL6-500
IL-1β	S0C3013	S0C3029	KIT-IL1B-500	KIT-MIL1B-500

 

Caspase-1活性比色试剂盒（货号：abs50023，Caspase 1 活性检测试剂盒，Absin）

 

与IL-1β释放数据交叉验证，确保降解剂真身作用于炎症小体而非下游分泌

 

④ NLRP3 ATPase activity and inhibition

 

ADP激酶活性检测试剂盒（货号：UA070101，UA-Glo® Kinase ADP Assay，UA BIOSCIENCE）

 

➄转化医学 & 临床前PK/PD

 

人/猴/小鼠PBMC通用protocol**

 

血清IL-1β灵敏度2.519pg/ml

 

一步法Human IL-1β检测试剂盒(货号：S0C3013，Human IL-1β OneStep ELISA Kit，STARTER)

 

一步法Mouse IL-1β检测试剂盒：（货号：S0C3029 Mouse IL-1β OneStep ELISA Kit, STARTER）

 

体内药效验证------NLRP3 靶向化合物对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的干预效应

 

• 抗原：MOG₃₅₋₅₅ 肽段（abs815889），用于诱导 T 细胞介导的脱髓鞘反应

 

• 佐剂：弗氏完全佐剂（abs9270，含 5 mg/mL 热灭活结核分枝杆菌），强化 NLRP3 依赖的先天免疫激活

 

• 促透剂：百日咳毒素（abs42024902 / abs42024900），破坏血脑屏障并二次刺激 NLRP3 炎症小体