NGS精选专用酶，提升文库构建效率

引言

随着生物技术的飞速发展，下一代测序（Next Generation Sequencing，NGS）技术已成为生物学和医学研究的重要工具。

在NGS的复杂流程中，各种专用酶发挥着至关重要的作用。

末端修复&加A

在DNA片段化过程中，打断产生的DNA片段有的是平末端，有些是粘性末端，且其末端不一定存在磷酸基团或者羟基基团。平末端经过加A步骤后就可以与带有突出T的接头进行连接了，而粘性末端，还需要补齐后才可以进行加A。

Klenow片段主要用于DNA片段的末端修复和补平。在文库构建过程中，DNA片段的末端状态对于后续的测序反应至关重要。如果DNA片段的末端存在缺口或突出，可能会影响测序的准确性和效率。

接头连接

在文库构建与测序流程中，接头扮演着不可或缺的角色，常用的Illumina平台Y型接头，包含P5/P7、Index、以及Rd1/Rd2 SP序列。其中，P5/P7序列用于和测序芯片上的序列进行配对，将待测片段固定在Flowcell上完成桥式扩增；Index用来区分上机测序混合文库中的不同样本，而Rd1/Rd2 SP是Read1和Read2测序引物结合区域。

接头连接一般用T4 DNA连接酶，它可以修复双链DNA上的单链切口，使两个相邻的核苷酸重新连接起来，在接头连接中可将带有“T”黏性末端的接头和带“A”黏性末端的DNA片段连接起来形成一个完整的双链。

展望

DNA Polymerase I Large (Klenow) Fragment和T4 DNA Ligase是NGS中不可或缺的两种专用酶。它们在NGS文库构建的不同步骤中发挥着独特的功能：Klenow片段主要用于DNA片段的末端修复和补平，以确保DNA片段的末端状态适合后续的测序反应；而T4 DNA Ligase则用于连接DNA片段与测序接头，为后续的测序反应提供基础。这两种酶的应用不仅提高了NGS的测序效率和准确性，也为生物学和医学研究提供了强有力的技术支持。